exoRNeasy Midi and Maxi Kits

Cat. No. / ID: 77144

· 高純度的總RNA(包括小RNA部分)來(lái)自外泌體和其他細(xì)胞外囊泡(ev)

· 只從外泌體中分離RNA，不包括非囊泡蛋白復(fù)合物中的RNA

· 方便的柱上程序可以在一小時(shí)內(nèi)獲取RNA

· Maxi試劑盒提供的高靈敏度，允許大樣本輸入量檢測(cè)低豐度RNA

· 從大多數(shù)生物液體中分離，包括尿液、血清、血漿、腦脊液和細(xì)胞培養(yǎng)上清

Product Details

exoRNeasy Midi and Maxi Kits使用親和性膜離心柱，有效地從大多數(shù)生物液體，包括尿液，血清，血漿，腦脊液和細(xì)胞培養(yǎng)上清中捕獲外泌體和其他ev。然后，試劑盒使用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的RNeasy MinElute自旋柱從ev中分離RNA。midi柱格式可以高效地處理較小的樣本體積(最多1ml血清/血漿或4ml尿液)，而maxi柱格式允許使用大樣本體積，最多4ml血清/血漿、16ml尿液或32ml細(xì)胞培養(yǎng)上清，以高置信度檢測(cè)低豐度rna。結(jié)果是快速，一致和高度適合敏感的下游應(yīng)用。

Performance

exoRNeasy純化外泌體和其他細(xì)胞外囊泡的方案不僅比超離心更快，而且制備的制劑更干凈。掃描電子顯微鏡顯示，雖然這兩種技術(shù)都能提供預(yù)期大小的完整囊泡，但超離心制備也包含許多較小的結(jié)構(gòu)，它們與預(yù)期大小或形狀不匹配。

此外，由Bioanalyzer分析，exoRNeasy和傳統(tǒng)的超離心方法提供了類(lèi)似的大小和產(chǎn)量大小的RNA。

最后，exoRNeasy在血漿中捕獲所有無(wú)細(xì)胞mRNA，以及ev相關(guān)的miRNAs，這是通過(guò)RT-qPCR實(shí)驗(yàn)對(duì)使用exoRNeasy純化的RNA和從exoEasy柱流出得到確認(rèn)的。

Principle

exoRNeasy Midi and Maxi Kits改進(jìn)了傳統(tǒng)的超離心微囊分離方法，在短短20分鐘內(nèi)產(chǎn)生純化的細(xì)胞外囊泡。使用Exosome Diagnostics公司開(kāi)發(fā)的技術(shù)，試劑盒使用自旋柱格式和專(zhuān)門(mén)的緩沖液從預(yù)過(guò)濾的生物液體中捕獲外泌體;使用Maxi試劑盒可達(dá)32毫升，使用MIDI試劑盒可達(dá)4毫升。然后使用QIAGEN miRNeasy技術(shù)提取總RNA。整個(gè)過(guò)程，從樣本到RNA，只需要一個(gè)小時(shí)。

exoRNeasy血清/血漿啟動(dòng)試劑盒提供midi和maxi exoEasy柱，可在不同體積的預(yù)過(guò)濾生物液中進(jìn)行分析。

Procedure

從細(xì)胞外微泡分離RNA的完整實(shí)驗(yàn)包括兩步:純化exosomes和分離RNA。

在exosomes純化步驟，預(yù)過(guò)濾的而漿(不包含大干0.8uM的微粒)與Buffer XBP混合，加至exoEasav親和性膜離心柱上。

結(jié)合到柱上。使用BufferXWP洗滌結(jié)合在膜上的囊泡，之后使用QIAzol裂解。

在RNA分離步驟，在QIAzol洗脫液中加入氯仿，回收水相，將其與乙醇混合。包括miRNA在內(nèi)的總RNA結(jié)合到離心柱上，洗滌三次后洗脫。 

Applications

exoRNeasy試劑盒非常適合從生物流體樣品中發(fā)現(xiàn)的微囊中分離總RNA，包括mRNA和miRNA。