一、試劑盒簡(jiǎn)介

使用通過(guò)大腸桿菌Poly(A)聚合酶將polyA尾添加到miRNA的3'末端的方法來(lái)合成miRNA的第一鏈cDNA。該試劑盒中包含一個(gè)正向U6引物和一個(gè)通用qPCR反向引物(Universal3'qPCR引物)，可用于定量檢測(cè)所有 miRNA。因此，aPCR反應(yīng)僅需要每個(gè)靶標(biāo)miRNA的特異性正向引物。該試劑盒包括兩個(gè)步驟;首先，用gDNA去除劑處理RNA以消除基因組DNA。然后，在poly(A)拖尾反應(yīng)中，將poly(A)尾添加到miRNA分子的3'-末端。使用專門設(shè)計(jì)的UniversalRTPrimer進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)以生成miRNA的第一條鏈。

EZBioscience 加尾法逆轉(zhuǎn)錄升級(jí)版試劑盒是一種快速逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，其中包含里十去除基大組DNA的高效DNase。它包含四管試劑:gDNA去除劑，miRNART酶混合物，4xmiRNART緩沖液和Universal3qPCR引物。

其中，gDNA去除劑主要包括濃縮的DNase和緩沖液。它僅需在室溫(19~27℃下反應(yīng)5分鐘，即可降解超過(guò)95%的殘留基因組DNA，從而大大減少了對(duì)結(jié)果的干擾。

miRNART酶混合物主要包含大腸桿菌Poly(A)聚合酶，逆轉(zhuǎn)錄酶和RNase抑制劑。大腸桿菌Polv(A)聚合酶不僅具有添加poly(A)尾部的高效率，而且可以特異性識(shí)別單鏈miRNA，從而避免了具有雙鏈結(jié)構(gòu)的 miRNA前體的進(jìn)一步逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng);突變體M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶具有很強(qiáng)的抗干擾能力和擴(kuò)增能力，并且擴(kuò)增效率特別好。

4x miRNA RT Buffer包含用于miRNA聚腺苷酸化和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的所有原材料和引物，包括Oligo(dT)-通用標(biāo)簽引物，緩沖液和dNTPs，并且經(jīng)過(guò)仔細(xì)優(yōu)化，以確保同時(shí)進(jìn)行聚腺苷酸化和逆轉(zhuǎn)錄。

二、產(chǎn)品組分

三、保存條件

-20℃保存

四、EZBioscience 加尾法逆轉(zhuǎn)錄升級(jí)版試劑盒特點(diǎn)

加尾法一步快速高效率將所有miRNA逆轉(zhuǎn)錄為可直接檢測(cè)的cDNA。無(wú)需設(shè)計(jì)miRNA特異性引物，僅需30分鐘即可完成microRNA的逆轉(zhuǎn)錄，簡(jiǎn)單高效率。含有通用的反向qPCR引物，可使用常規(guī)qPCR試劑。